| Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统介导的重组腺相关病毒制备 |
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| 引用本文： | 陈雅宁,王春荣,杨宗灿,姬朝霞,张延瑞,韩双印. Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统介导的重组腺相关病毒制备[J]. 中华实验外科杂志, 2012, 29(7) |
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| 作者姓名： | 陈雅宁 王春荣 杨宗灿 姬朝霞 张延瑞 韩双印 |
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| 作者单位： | 1. 河南大学医学院研究生院,450003
2. 450003,郑州大学人民医院中心实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，河南省重点科技计划攻关项目，河南省医学科技计划攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立高效的临床级重组腺相关病毒( rAAV)制备方法.方法 将rAAV的反向末端重复序列( ITR)及目的基因表达框(2053 bp)从pAAV-MCS剪切引入杆状病毒载体中构建顺式载体,rAAV血清型2的衣壳和复制蛋白基因在反式载体pFastBacDual中利用真核基因遗漏扫描原理表达,两者分别制备成杆状病毒,共感染昆虫细胞sf9包装rAAV.增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因验证其可行性.结果 顺式和反式杆状病毒载体分别在DH 10BacTM中转座形成杆粒bacmid、昆虫细胞sf9中制备成杆状病毒,病毒滴度可达1×108～3 ×108 v.g./ml.二杆状病毒共感染昆虫细胞sf9,完成rAAV拯救、复制和包装过程,经rAAV-EGFP感染293T细胞测试具有良好的生物学活性.结论 该系统具有高效、安全、简便等特点,为临床级rAAV制备和基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 杆状病毒昆虫表达系统 腺相关病毒 sf9细胞 |
Production of adeno-associated virus mediated by Bac-to-Bac baculovirus insect expression system |
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| CHEN Ya-ning , WANG Chun-rong , YANG Zong-can , JI Zhao-xia , ZHANG Yan-rui , HAN Shuang-yin. Production of adeno-associated virus mediated by Bac-to-Bac baculovirus insect expression system[J]. Chinese Journal of Experimental Surgery, 2012, 29(7) |
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| Authors: | CHEN Ya-ning WANG Chun-rong YANG Zong-can JI Zhao-xia ZHANG Yan-rui HAN Shuang-yin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Baculovirus insect expression system Adeno-associated viruses sf9 cells |
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