| 整合稳定靶向高迁移率族蛋白B1基因shRNA载体的人脐静脉内皮细胞株建立 |
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| 引用本文： | 张晓娟,栾正刚,马晓春.整合稳定靶向高迁移率族蛋白B1基因shRNA载体的人脐静脉内皮细胞株建立[J].中国危重病急救医学,2012,24(9). |
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| 作者姓名： | 张晓娟 栾正刚 马晓春 |
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| 作者单位： | 中国医科大学附属第一医院重症医学科,辽宁沈阳,110001 |
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| 摘 要： | 目的 构建针对高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)基因的特异性RNA干扰载体,建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC).方法 根据HMGB1基因的编码序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计并合成针对HMGB1基因的特异性shRNA,将其定向克隆到pRNA-u6.1/Neo载体中,同时设立阴性对照,重组载体经脂质体转染HUVEC;转染细胞经类氨基糖抗生素样物质G418筛选,采用实时荧光逆转录-聚合酶链反应检测HMGB1mRNA表达,蛋白质免疫印迹法检测HMGB1蛋白表达.结果 酶切鉴定和测序证实,重组质粒shRNA序列与设计的片段完全一致.HMGB1基因特异性RNA干扰载体能够显著抑制HMGB1在HUVEC细胞中的表达(mRNA:0.4635±0.0342比1.0340±0.0352,蛋白:0.4510 ± 0.0200比1.0210±0.0110,均P＜0.05).结论 成功构建了靶向HMGB1基因的shRNA真核表达载体pRNA-HMGB1,并获得了稳定表达靶向HMGB1基因的shRNA的HUVEC细胞株,为进一步研究HMGB1在HUVEC细胞株中的生物学功能和作用机制奠定了基础.
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| 关 键 词： | 高迁移率族蛋白B1 人脐静脉内皮细胞 转染 脓毒症 短发夹RNA |
Construction of stable human umbilical vein endothelial cells line expressing short hairpin RNA (shRNA) targeting high mobility group box-1 gene |
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| ZHANG Xiao-juan
,
LUAN Zheng-gang
,
MA Xiao-chun.Construction of stable human umbilical vein endothelial cells line expressing short hairpin RNA (shRNA) targeting high mobility group box-1 gene[J].Chinese Critical Care Medicine,2012,24(9). |
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| Authors: | ZHANG Xiao-juan LUAN Zheng-gang MA Xiao-chun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | High mobility group box-1 Human umbilical vein endothelial cell Transfection Sepsis Short hairpin RNA |
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