13-顺维甲酸体外诱导神经母细胞瘤干细胞分化的体外实验

目的 体外观察并鉴定13-顺维甲酸诱导神经母细胞瘤（NB）干细胞的分化作用，为临床用维甲酸治疗NB微小残留病灶提供实验依据。方法 取14例伴骨髓转移的Ⅳ期NB患儿的骨髓液标本，分离出NB细胞，将原代肿瘤细胞接种于无血清干细胞培养基中悬浮培养；在含5 μmol·L-1 13-顺维甲酸的分化培养基中培养神经球细胞，观察细胞的形态变化；RT-PCR法检测神经球细胞诱导前、诱导3和9 d Oct-4表达水平的改变；利用细胞免疫荧光技术比较诱导前及诱导9 d神经球细胞nestin表达的差异。结果 14例骨髓标本中，4例分离到原代NB细胞。无血清培养基中培养4~6 d后，可见原代悬浮神经球形成，传代后成球细胞能再次分裂增殖为神经球。神经球细胞在血清培养基中呈贴壁生长，呈三角形或星形，添加5 μmol·L-1 13-顺维甲酸后，细胞生长速度降低，形态发生明显改变。RT-PCR法检测结果显示，13-顺维甲酸诱导9 d后，神经球细胞Oct-4表达水平逐渐降低；细胞免疫荧光显示诱导9 d后神经球细胞nestin表达减弱。结论 13-顺维甲酸能有效诱导NB干细胞分化。

The experimental research of using 13-cis-retinoic acid to induce differentiation of stem cells of neuroblastoma in vitro