| 增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因共表达载体的构建和表达 |
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| 引用本文： | 郑敏明,周希瑗,王丽萍.增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因共表达载体的构建和表达[J].第三军医大学学报,2010,32(15). |
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| 作者姓名： | 郑敏明 周希瑗 王丽萍 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第二医院眼科,眼科学重庆市市级重点实验室,重庆,400010 |
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| 摘 要： | 目的 构建增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因的真核共表达载体并鉴定其在真核细胞中的表达.方法 用PCR技术对cDNA-Rb质粒中的目的基因片段进行扩增,使用BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切,切胶回收DNA片段.将其连接入pEGFP-C1,构建pEGFP-C1/Rb94真核表达载体并再进行酶切鉴定.将重组质粒用脂质体转染法转染至人视网膜母细胞瘤细胞(HXO-Rb44)中,荧光显微镜下观察EGFP在细胞内的表达,Western blot检测Rb蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 重组克隆载体内的目的片段序列与Rb94基因序列完全一致.pEGFP-C1/Rb94酶切鉴定结果与预期结果一致.荧光显微镜下观察可见转染后的细胞有荧光出现.Western blot检测结果表明Rb94基因得到了有效表达.流式细胞仪检测结果显示,含Rb94基因的细胞凋亡率为(21.17±0.45)%,明显高于其他组(P<0.05).结论 成功构建EGFP和Rb94真核共表达载体,并可在真核细胞中有效表达,Rb94对视网膜母细胞瘤细胞有明显抑制生长作用.
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| 关 键 词： | Rb94基因 真核表达载体 人视网膜母细胞瘤细胞 |
Construction of enhanced green fluorescent protein and Rb94 co-expression vector and its expression |
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| Zheng Minming,Zhou Xiyuan,Wang Liping.Construction of enhanced green fluorescent protein and Rb94 co-expression vector and its expression[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2010,32(15). |
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| Authors: | Zheng Minming Zhou Xiyuan Wang Liping |
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| Institution: | Zheng Minming,Zhou Xiyuan,Wang Liping(Chongqing Key Laboratory of Ophthalmology,Department of Ophthalmology,Second Affiliated Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing,400010,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Rb94 gene eukaryotic expression vector human retinoblastoma cells |
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