CMY-39新基因亚型AmpC β-内酰胺酶的特性研究 |
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作者姓名: | 卢肖霞 徐韫健 谭皓妍 梁权辉 张东梅 |
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作者单位: | [1]广州医学院第一附属医院皮肤科实验室,广东广州510120 [2]广州医学院第一附属医院检验科,广东广州510120 [3]广州市海珠区第二人民医院检验科,广东广州510250 [4]广州医学院第一临床学院09级,广东广州510182 |
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基金项目: | 广州市医药卫生科技项目(201102A213135) |
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摘 要: | 目的对弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY-39新基因亚型AmpCβ-内酰胺酶进行酶特性研究。方法 pET-32a(+)/CMY-39表达质粒在BL21(DE3)中诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定酶蛋白的表达;原菌株和重组表达菌株进行药敏试验,并提取重组表达菌株的CMY-39酶蛋白进行AmpC酶三维试验和酶动力学检测。结果 pET-32a(+)/CMY-39在大肠埃希菌中大量表达,蛋白相对分子质量约为60000,用特异抗体经Western检测该条带为阳性;AmpC酶三维试验为阳性;CMY型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢西丁具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致。结论证实重组菌株pET-32a(+)/CMY-39能高效表达CMY-39酶蛋白,表达CMY型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性有所增加,亲和力下降。
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关 键 词: | CMY 弗劳地枸橼酸杆菌 酶动力学 |
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