慢病毒介导的shRNA干扰人HepG2.2.15细胞Akt2基因表达的研究

目的针对Akt2基因构建shRNA慢病毒干扰载体并评价慢病毒介导的RNA干扰在人HepG2.2.15中的基因沉默效应。方法设计Akt2的RNAi寡聚核苷酸序列,利用慢病毒载体构建Akt2的shRNA载体,转染入大肠埃希菌并观察重组表达状况,利用293T细胞包装得到重组腺病毒,以绿色荧光蛋白(GFP)作为标记,逐孔稀释法确定转染效率及滴度,以实时荧光定量法比较各组对Akt2 mRNA的干扰效果。结果筛选了所构建的3个Akt2靶向序列,包装shRNA慢病毒后转染HepG2.2.15细胞,慢病毒转染后的沉默效率可达85%,比较得出沉默效率最高的靶序列和工作条件。结论本研究成功构建并筛选了针对Akt2的shRNA慢病毒载体,有效抑制HepG2.2.15细胞中Akt2 mRNA的表达。