| shRNA介导的RNAi载体构建及对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制 |
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| 引用本文： | 秦维超,张有顺,周新,胡礼仪. shRNA介导的RNAi载体构建及对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制[J]. 医学争鸣, 2007, 28(18): 1639-1642 |
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| 作者姓名： | 秦维超 张有顺 周新 胡礼仪 |
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| 作者单位： | 郧阳医学院附属人民医院,湖北,十堰,442000;郧阳医学院附属东风医院,湖北,十堰,442008;武汉大学中南医院,湖北,武汉,430071;郧阳医学院附属东风医院,湖北十堰,442008 |
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| 摘 要： | 目的:重组构建抑制多药耐药MDR1基因表达的shRNA真核表达载体,研究其对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制作用,以及对P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的抑制作用.方法:根据MDR1基因序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列作为shRNA目标序列(sh-MDR1-1,sh-MDR1-2),重组构建psh-MDR1表达质粒.采用脂质体介导转染肝癌耐药细胞SMMC-7721/R,用MTT法测定细胞对化疗药物阿霉素(ADM)的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)表达和细胞内Rhdaming123(Rh123)的潴留.结果:PCR和DNA测序证实了psh-MDR1-1和psh-MDR1-2重组质粒的成功构建,均能有效地抑制细胞P-gp表达;转染细胞后均能够一定程度地恢复耐药细胞对化疗药物ADM敏感性,P-gp表达水平明显降低,细胞内的Rh123稳态积累量均明显增高;第1条序列更能有效的抑制MDR1基因表达.结论:体外完成shRNA RNAi载体的构建,能有效地逆转肝癌耐药细胞MDR1基因过度表达,抑制P-gp介导的多药耐药.从DNA载体产生的shRNA在肝癌耐药细胞内能诱导RNAi,能够序列特异性地抑制MDR1基因表达.
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| 关 键 词： | RNA干扰 抗药性 多药 短发夹RNA 重组 遗传 质粒 基因表达 |
| 文章编号： | 1000-2790（2007）18-1639-04 |
| 修稿时间： | 2007-02-02 |
shRNA-mediated construction of RNAi expression plasmid and its inhibitory effect on MDR1 expression in hepatocellular carcinoma cell SMMC-7721/R |
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| QIN Wei-Chao,ZHANG You-Shun,ZHOU Xin,HU Li-Yi. shRNA-mediated construction of RNAi expression plasmid and its inhibitory effect on MDR1 expression in hepatocellular carcinoma cell SMMC-7721/R[J]. Negative, 2007, 28(18): 1639-1642 |
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| Authors: | QIN Wei-Chao ZHANG You-Shun ZHOU Xin HU Li-Yi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference drug resistance, multiple short hairpin RNA recombination, genetic plasmids gene expression |
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