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| 人Tau基因多表位肽段原核表达载体的构建与表达 | |
| 作者姓名： | 孙海涛 杨化强 杨璐军 李正阳 杜谋选 陈宇新 姜晓丹 |
| 作者单位： | 孙海涛 (南方医科大学广东神经外科研究所) ； 杨化强 (珠江医院神经外科) ； 杨璐军 (广东省脑功能修复与再生重点实验室) ； 李正阳 (国家临床重点专科,广东广州510282) ； 杜谋选 (中国科学院广州生物医药与健康研究院华南干细胞与再生医学重点实验室,广东广州,510530) ； 陈宇新 (南方医科大学广东神经外科研究所) ； 姜晓丹 (珠江医院神经外科) ； |
| 基金项目： | 国家自然科学基金,广东省及广州市科技计划重点项目 |
| 摘 要： | 摘要：目的构建含人Tau多表位肽段基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达并纯化目的蛋白，检测Tau多表位DNA疫苗 免疫小鼠后特异性抗体产生情况。方法以质粒pVAX1-Tau 为模板，用PCR 扩增人Tau 多表位肽段基因，插入表达载体 pGEX-4T-2中，构建原核表达质粒pGEX-4T-2-TauP1/P2。将鉴定后的阳性重组质粒转入E.coli BL21（DE3）中，经异丙基-β-D- 硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，并采用GST法纯化、SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达。以TauP1/P2 DNA疫苗免疫小鼠获 取血清，Dot-blot检测TauP1/P2特异性抗体产生情况。结果PCR扩增出约300 bp的基因片段，克隆至表达载体后，经酶切和测 序验证正确；获得了纯化的目的蛋白，并证实了GST-TauP1/P2融合蛋白的表达。Dot-blot检测到特异性TauP1/P2抗体的产生。 结论成功构建和表达人Tau多表位肽段基因的目的蛋白GST-TauP1/P2，能够识别Tau多表位DNA疫苗免疫后小鼠产生的特 异性TauP1/P2抗体。 |
| 关 键 词： | Tau 质粒 原核表达 融合蛋白 |
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