| 弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试 |
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| 引用本文： | 李月玥,刘先凯,冯尔玲,王恒樑,陈福生,朱力. 弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试[J]. 军事医学, 2012, 36(5): 345-350 |
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| 作者姓名： | 李月玥 刘先凯 冯尔玲 王恒樑 陈福生 朱力 |
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| 作者单位： | 李月玥 (华中农业大学食品科技学院,武汉,430070) ； 刘先凯 (军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071) ； 冯尔玲 (军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071) ； 王恒樑 (军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071) ； 陈福生 (华中农业大学食品科技学院,武汉,430070) ； 朱力 (军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071) ； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目,国家973计划资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记(SILAC)技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础。方法采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型测评和毒力评价,并利用双向电泳技术比较二者在全菌蛋白表达谱上的差异,最后将突变株分别在含有12C6-赖氨酸和13C6-赖氨酸的培养基中培养,根据双向电泳胶图取对应蛋白点进行胶内酶切及MALDI-TOF/TOF分析。结果成功构建了301 lysA基因缺失突变株,蛋白鉴定结果显示所取对应蛋白点为同一蛋白,在质谱图上轻重同位素峰位移为6 amu。结论本研究所构建的赖氨酸营养缺陷型突变株适合进行SILAC分析。
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| 关 键 词： | 志贺菌,弗氏 赖氨酸营养缺陷型突变株 基因缺失 λ-Red重组系统 双向电泳 SILAC |
Construction of a lysA deletion mutant of Shigella flexneri and pre-experiment of SILAC |
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| LI Yue-yue,LIU Xian-kai,FENG Er-ling,WANG Heng-liang,CHEN Fu-sheng,ZHU Li. Construction of a lysA deletion mutant of Shigella flexneri and pre-experiment of SILAC[J]. Military Medical Sciences, 2012, 36(5): 345-350 |
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| Authors: | LI Yue-yue LIU Xian-kai FENG Er-ling WANG Heng-liang CHEN Fu-sheng ZHU Li |
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| Affiliation: | 1.College of Food Science and Technology,Huazhong Agriculture University,Wuhan 430070,China;2.State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Beijing Insitute of Biotechnology,Beijing 100071,China) |
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| Abstract: | |
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