| 环式增强型绿色荧光蛋白热稳定性及Npu DnaE内含肽高反式剪接效率研究 |
| |
| 引用本文： | 叶丙雨,王政,李德彬,张乐之,肖丽霞,张部昌,曹诚,赵志虎.环式增强型绿色荧光蛋白热稳定性及Npu DnaE内含肽高反式剪接效率研究[J].军事医学,2012,36(4):253-257,262. |
| |
| 作者姓名： | 叶丙雨 王政 李德彬 张乐之 肖丽霞 张部昌 曹诚 赵志虎 |
| |
| 作者单位： | 叶丙雨 (安徽大学生命科学学院,合肥,230601) ； 王政 (军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071) ； 李德彬 (军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071) ； 张乐之 (军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071) ； 肖丽霞 (军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071) ； 张部昌 (军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071) ； 曹诚 (安徽大学生命科学学院,合肥,230601) ； 赵志虎 (军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071) ； |
| |
| 摘 要： | 目的在体内借助Npu DnaE内含肽(intein)的高效反式剪接作用获得环式增强型绿色荧光蛋白(Cyc-EGFP)。方法对构建的融合表达载体pET/Npu DnaE intein/EGFP-28a(+)进行诱导、表达,之后利用亲和纯化获得高纯度的Cyc-EGFP和增强型绿色荧光蛋白(EGFP),并对二者的荧光强度和热稳定性进行比较。结果 NpuDnaE内含肽环化效率可达98%以上,明显优于Ssp DnaE内含肽,环化后的EGFP热稳定性提高了4～5℃。结论 Cyc-EGFP这一明显优势使蛋白环化在蛋白质工程等领域具有重要的应用价值。
|
| 关 键 词： | 蛋白环化 内含肽类 Cyc-EGFP 反式剪接 热稳定性 |
Thermostability of cyclic EGFP and highly efficient protein trans-splicing of Npu DnaE intein |
| |
| Authors: | YE Bing-yu WANG Zheng LI De-bin ZHANG Le-zhi XIAO Li-xia ZHANG Bu-chang CAO Cheng ZHAO Zhi-hu |
| |
| Institution: | 2* (1.School of Life Sciences,Anhui University,Hefei 230601,China;2.Beijing Institute of Biotechnology,Beijing 100071,China) |
| |
| Abstract: | Objective To produce Cyclic enhanced green fluorescent protein(Cyc-EGFP)in vivo using the highly efficient protein trans-splicing of Npu DnaE intein.Methods The fusion expression vector pET/Npu DnaE intein/EGFP-28a(+) was induced and expressed,and then using affinity purification high purity Cyc-EGFP and EGFP obtained,finally the fluorescence intensity and thermostability were compared.Results The trans-splicing activity of Npu DnaE intein had an efficiency above 98%,which was superior to that of Ssp DnaE intein.The Cyc-EGFP was 4-5℃ more thermostable than the linear form.Conclusion The obvious advantage of Cyc-EGFP makes protein cyclization highly applicable to protein engineering and other fields. |
| |
| Keywords: | protein cyclization inteins Cyc-EGFP trans-splicing thermostability |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
