苯二氮卓受体的提纯及受体亚基单克隆抗体的制备

用不实验室建立的亲和层析系统成功地址猪脑分离纯化了苯二氮卓受体（ＢＺ－Ｒ）。结合试验显示，纯化的ＢＺ－Ｒ和专一配基最大的结合容量为１９７０ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，解离常数Ｋｄ值为５．７ｌｎｍｏｌ／Ｌ，圆盘电泳和等电聚焦电泳均显示出单一区带。纯化受体经ＳＤＳ一聚丙烯酰胺不连续电泳，可分离出分子量分别为５９ｋｕ、５６ｋｕ、５１ｋｕ、４８ｋｕ和３８ｋｕ的５条区带。用这些区带蛋白免疫动物，得到了３种单克隆抗体，酶联免疫检测显示，它们和纯化受体结合的最大滴度分别为１：３００００，１：２２０００，１：２２０００．免疫印迹显示，３种单克隆抗体分别和５９ｋｕ、５６ｋｕ、５１ｋｕ的亚基结合，显示出单一清晰的反应带。以上结果说明，我室建立的ＢＺ－Ｒ亲和层析系统是一个稳定、重复性好的受体纯化系统。纯化的ＢＺ－Ｒ对专一配基有根高的亲和力并达到较高的纯度。纯化的ＢＺ－Ｒ最少由４个亚基组成。制备的３种单克隆抗体有一定效价及很高的特异性。