健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响

背景：成骨细胞数量减少或凋亡进程加速，使骨形成少于骨吸收可导致骨质疏松的发生。肿瘤坏死因子α在去势大鼠或绝经后骨质疏松患者骨组织中呈高表达，在体外可刺激成骨细胞凋亡。健骨颗粒可降低骨质疏松模型鼠血清肿瘤坏死因子α水平。目的：验证健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子α诱导的鼠成骨细胞凋亡的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-07/2006-12 在福建中医学院骨伤系分子生物学实验室完成。材料：3月龄SD雌性大鼠40只用于制备含药血清，24 h SD乳鼠5只用于培养成骨细胞。健骨颗粒由煅狗骨、淫羊藿、山茱萸、党参等药味组成，原药材由福建省药材公司提供，福建中医药研究院中试车间加工制备，每克颗粒含原生药2.9 g。方法：用酶消化法培养成骨细胞。随机将40只SD大鼠分为高、中、低剂量含药血清组和生理盐水对照组，每组10只，分别将健骨颗粒按4，2，1 g/(kg•d)的药量灌服，对照组每天灌服2 mL生理盐水。连续给药7 d后腹主动脉取血得到健骨颗粒含药血清，将含药血清作用于成骨细胞48 h后，再用肿瘤坏死因子α诱导24 h。运用TUNEL技术、流式细胞术、免疫细胞化学结合图像分析方法，检测成骨细胞凋亡情况。主要观察指标：①成骨细胞凋亡指数。②成骨细胞凋亡峰。③成骨细胞Bcl-2、Bax表达。结果：用肿瘤坏死因子α诱导的各组成骨细胞均出现凋亡现象，其中中、高剂量含药血清组的细胞凋亡指数和凋亡率明显低于其他组，而Bcl-2/Bax灰度比值却较其他组高(P < 0.05)，Bcl-2/Bax灰度比值与凋亡指数呈负相关(r =-0.757, P < 0.01)。结论：健骨颗粒对肿瘤坏死因子α诱导的成骨细胞凋亡有一定的保护作用，可能通过提高Bcl-2的表达来实现。

Effect of the serum containing Jiangu granules on osteoblast apoptosis induced by tumor necrosis factor alpha in rats