抑制SGLT对软脂酸诱导的内皮细胞损伤影响研究

目的探讨采用软脂酸（PA）诱导人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗下，钠葡萄糖共转运体（SGLT）的表达变化，及抑制SGLT表达后对内皮细胞损伤的影响和作用机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为空白对照组（DMSO组）、PA组、PA+Insulin组、PA+根皮苷（PH）组、PA+PH+LY组。DMSO组细胞加入DMSO处理，作对照用；PA组用0.3mmol/LPA干预18h建立胰岛素抵抗模型；PA+Insulin组、PA+PH组在PA组处理的基础上再分别给予100nmol/L胰岛素、PH干预30min；PA+PH+LY组预先加入100nmol/L磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）抑制剂LY294002孵育30min，后再加入PH干预30min。采用Westernblot法检测各组细胞SGLT1、SGLT2、磷酸化胰岛素受体底物1（p-IRS-1）、磷酸化AKT（p-AKT）、磷酸化eNOS（p-eNOS）蛋白表达水平，采用RT-PCR法检测SGLT1、SGLT2mRNA表达水平，采用硝酸盐还原酶法检测NO浓度和葡萄糖消耗量。采用siRNA转染内皮细胞以沉默SGLT1和SGLT2，分为DMSO组、PA组和PA+si-Ctrl组、PA+si-SGLT1组、PA+si-SGLT2组，其中PA+si-Ctrl组细胞用无意义片段转染，采用Westernblot法检测p-IRS-1、p-AKT、p-eNOS蛋白表达水平。结果PA组细胞SGLT1、SGLT2蛋白和mRNA表达水平较DMSO组增加（均P＜0.05），PA+PH组细胞SGLT1、SGLT2蛋白和mRNA表达水平较PA组降低（均P＜0.05）。PA组细胞葡萄糖消耗量与NO浓度均低于DMSO组（均P＜0.05），PA+Insulin组、PA+PH组细胞葡萄糖消耗量与NO浓度均高于PA组（均P＜0.05）。PA组细胞p-IRS-1、p-AKT、p-eNOS蛋白表达水平及NO浓度均低于DMSO组（均P＜0.05）。PA+PH组细胞p-AKT、p-eNOS蛋白表达水平及NO浓度均较PA组升高（均P＜0.05），但p-IRS-1蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。PA+PH+LY组细胞p-AKT、p-eNOS蛋白表达水平均较PA+PH组降低（均P＜0.05），但p-IRS-1蛋白表达水平及NO浓度比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。PA+si-SGLT1组、PA+si-SGLT2组细胞p-AKT、p-eNOS蛋白表达水平均明显高于PA组和PA+si-Ctrl组（均P＜0.05）。与DMSO组相比，p-IRS-1在PA组、PA+si-Ctrl组和PA+si-SGLT1组、PA+si-SGLT2组明显下调，但组间比较均无统计学差异（均P＞0.05）。结论PA可增加SGLT在内皮细胞的表达；抑制SGLT可激活PI3K/AKT/eNOS通路，使NO的释放增加，从而改善胰岛素抵抗下的内皮细胞损伤。