沉默蛋白激酶C 对高糖刺激成纤维细胞Toll 样受体及核因子kappa B 基因表达的影响

目的:探索siRNA 沉默蛋白激酶C(PKC)对高糖刺激成纤维细胞在Toll 样受体(TLRs)信号传导通路中TLRs 及核因子kappa B(NF-κB) 表达的影响。方法:高糖刺激下用real-time PCR 检测TLR2、TLR4 的表达水平，确定何种受体发生改变后进行后续实验。设计并合成针对PKC 不同亚单位的特异性siRNA :PKC-αsiRNA、PKC-βsiRNA、PKC-δsiRNA，在高效率转染的基础上，对PKC 进行沉默，高糖刺激后用real-time PCR 方法检测TLRs、NF-κBp50 和NF-κB p65 的表达情况，以低糖培养作对比。结果:成纤维细胞中高糖刺激下TLR2 的mRNA 水平显著升高(P ＜ 0.05)，而TLR4 的mRNA 表达无明显变化(P ＞ 0.05)。在高糖刺激下PKC-αsiRNA、PKC-δsiRNA 可下调TLR2、NF-κB p65的mRNA 水平(P ＜ 0.05)，而PKC-βsiRNA 对TLR2、NF-κB p65 的mRNA 水平无影响(P ＞ 0.05)。与低糖培养条件对比，高糖刺激下NF-κB p50 水平无改变(P ＞ 0.05)，而且PKC-α siRNA、PKC-β siRNA 和PKC-δ siRNA 转染后不改变细胞中NF-κB p50 的水平。结论:成纤维细胞信号传导通路中PKC-α、PKC-δ 位于TLR2、NF-κB p65 的上游。