| 摘 要： | 目的利用CRISPR/Cas9系统构建APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病（AD）小鼠模型,为开展AD的病因治疗提供载体。方法采用CRISPR/Cas9系统，选择H11作为插入位点，将有活性的sgRNA、Cas9RNA和含有目标同源重组序列的载体显微注射入C57BL/6品系野生雌性小鼠的受精卵中，鉴定得到的F0代阳性小鼠再与C57BL/6野生小鼠交配，从而获得F1代小鼠。对鉴定得到的F1代杂合子小鼠，选择来自同一只F0代小鼠基因型一致的F1代杂合子小鼠，达到性成熟后进行同胞交配，获得F2代小鼠。采用PCR方法鉴定F2代小鼠的基因型结果，采用Westernblot检测APP和PS1在F2代小鼠脑组织中的蛋白表达水平。结果27只F2代小鼠经PCR鉴定基因型，5只F2代小鼠出现约344bp和608bp的目的基因条带，表明成功构建出转入APP和PS1基因的APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠。Westernblot检测显示APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠的APP和PS1的表达水平均明显高于同窝野生型小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统可成功构建APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠。
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