单纯酶和复合酶消化液对成猪胰岛细胞分离的作用及其机制

背景：近来，从大动物获得大量存活的胰岛细胞技术已经日趋成熟，并且已经应用到了临床。然而大量研究表明，同小动物相比，猪胰岛细胞的收获量，还是相对过低，究其原因，是否与猪胰腺外分泌组织生化成分有关?此研究旨在为糖尿病患者提供可靠的胰岛细胞来源。目的：探讨单纯酶和复合酶消化液对成猪胰岛细胞分离的作用及其机制，为糖尿病患者的二级康复措施介入提供理论依据。设计：以动物为研究对象，随机对照实验研究。单位：一所大学医院的普外科和老年病科。材料：实验于2003—06／2004—05在哈尔滨医科大学附属第二医院完成。哈尔滨市哈达屠宰厂提供成年杂种活猪20头，猪龄12—24个月，体质量100kg左右。干预：屠宰放血后在相对无菌情况下，仔细取出胰腺脾部放在冷RPMI1640液内，迅速送到实验室。快速去除胰周组织，脂肪、血管等。用1：5000洗必泰浸泡3min，然后用冷RPMI1640液冲洗，4℃条件下在平皿中用眼科剪剪成1mm&;#215;1mm&;#215;1mm左右的碎片，均分成两份，分别放入含有单纯酶溶液和和复合酶溶液的锥形瓶中，分级消化获得胰岛细胞。主要观察指标：经双硫腙染色计数胰岛细胞，并做椎虫蓝染色测定胰岛细胞活性，胰岛素释放试验观察胰岛细胞的功能；电子显微镜对胰岛细胞团检查，检验其结构的完整性。结果：复合酶消化制备物在平均产量上与单纯酶制备物相比有显著差异[(1782&;#177;427)IE／g比(1293&;#177;451)IE／g，P&;lt;0．05]，但在形态学及生物学活性方面无明显差异(P&;gt;0．05)。结论：复合酶消化法有利于在稳定胰岛细胞活性基础上提高胰岛细胞产量，移植此种胰岛细胞可以用于有效控制糖尿病患者并发症的发生和发展。