| 质粒介导的RNAi技术对大鼠CⅡTA和MHCⅡ基因表达抑制的检测 |
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| 引用本文： | 刘刚,何向辉,赵娜,朱理玮.质粒介导的RNAi技术对大鼠CⅡTA和MHCⅡ基因表达抑制的检测[J].中华微生物学和免疫学杂志,2009,29(4). |
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| 作者姓名： | 刘刚 何向辉 赵娜 朱理玮 |
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| 作者单位： | 天津医科大学总医院普通外科,300052 |
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| 基金项目： | 高等学校博士学科点专项科研基金，天津医科大学科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 研究应用质粒介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对大鼠MHC Ⅱ类分子反式激活因子(MHCclass Ⅱ transactivator,C Ⅱ TA)和MHC Ⅱ基因表达的抑制作用.方法 根据大鼠CⅡTA基因信息,设计合成3条短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)并构建质粒载体,于体外转染大鼠骨髓源树突状细胞(DC)及体内转染大鼠脾脏,采用实时定量RT-PCR技术检测转染后DC和脾脏的C Ⅱ TA及MHCⅡ的mRNA表达变化,流式细胞术检测转染后MHCⅡ蛋白表达变化.结果 成功构建shRNA质粒载体,3个shRNA质粒转染组的DC和脾脏转染后的CⅡTA和MHC Ⅱ的mRNA表达水平及MHC Ⅱ抗原表达水平均明显减低(P<0.01),其中第1条shRNA的质粒转染组抑制效果最侍,C ⅡTA与MHCⅡ基因表达呈正相关.结论 应用C Ⅱ TA靶向shRNA质粒载体在体内外均能显著抑制C Ⅱ TA和MHC Ⅱ基因表达,为进一步基因治疗研究奠定实验基础.
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| 关 键 词： | RNA干扰 C ⅡTA MHC Ⅱ 质粒载体 |
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