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| 未知cDNA扩增与亚克隆的方法学研究 | |
| 引用本文： | 邢桂春,贺福初.未知cDNA扩增与亚克隆的方法学研究[J].军事医学科学院院刊,1994,18(4):290-293. |
| 作者姓名： | 邢桂春 贺福初 |
| 作者单位： | Institute of Radiation Medicine，Academy of Military Medical Sciences |
| 摘 要： | 新型蛋白质的分子克隆基本依靠ｃＤＮＡ文库的筛选，而文库构建的载体多为λｇｔｌｌ。由于λｇｔｌｌＤＮＡ分子量较大（４９ｋｂ），提取过程中多用ＰＥＧ，因此λｇｔｌｌｃＤＮＡ克隆及其直接序列测定极为困难。为克服此困难，作者自行设计了不含克隆位点的一对公用λｇｔｌｌＰＣＲ引物。试用表明，此引物通过改变ＰＣＲ反应条件，可特异性地扩增多种彼此独立的ｃＤＮＡ。经亚克隆后的序列测定表明，用此方法扩增克隆的多种ｃＤＮＡ保留了原有阅读框架和ｐｏｌｙＡ特有序列，因而基本解决了新型蛋白质分子克隆中ｃＤＮＡ亚克隆与序列测定的困难． |
| 关 键 词： | 聚合酶链反应 λgll cDNA克隆 序列测定 |
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