苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养后细胞外泌体测序及功能分析

目的 筛选苍耳亭与MHCC97H共培养过程中差异miRNAs并进行验证，为寻找肝癌治疗靶点提供线索。方法 将苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养24 h,利用差速超离心法分离出外泌体。通过透射电镜观察外泌体的典型结构以及Western blotting分析外泌体标志性蛋白CD9和HSP70的表达来验证分离的是外泌体；检测苍耳亭与MHCC97H共培养后细胞外泌体的miRNA谱。筛选苍耳亭与MHCC97H细胞共培养和未共培养的MHCC97H细胞外泌体的差异miRNAs,通过GO和KEGG分析表征差异miRNAs的功能，分析差异miRNAs的潜在抗肿瘤意义。利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对筛选的4种差异miRNAs进行验证。结果 共鉴定出78个差异miRNAs,其中36个上调miRNA,42个下调miRNA。差异基因主要与肿瘤代谢通路相关。qRT-PCR实验结果显示，细胞外泌体let-7f-5p、let-7b-5p、miR-192-5p和miR-197-3p表达上调，与miRNA测序结果一致。结论 苍耳亭可调节肿瘤细胞来源的外泌体miRNA,这些外泌体对抑制肝癌具有重要意义。