最适苦参碱浓度并用冻存保护剂对L-02人肝细胞系冻存保护的效应

目的:观察不同浓度剂量苦参碱与冻存保护剂联用对L-02人肝细胞系液氮冻存复苏后功能的影响,探索一种适合肝细胞保存的新方法。方法:实验于2005-01/07在南方医科大学中心实验室进行。常规培养的L-02人细胞系用胰酶消化后,将收集的L-02人肝细胞系分别以6种不同的冻存液(10%二甲基亚砜、5%二甲基亚砜 0mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 0.2mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 2mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 10mg/L苦参碱)在液氮中冷冻保存1个月。1个月后快速复苏L-02人肝细胞系,进行存活率、形态学及功能检测。结果:①复苏后L-02人肝细胞系的活存率5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组明显高于其他处理组[胰酶刚消化的细胞活率为(96.2±1.4)%,10%二甲基亚砜组(76.6±3.8)%,5%二甲基亚砜组(81.9±2.4)%,5%二甲基亚砜 0.2mg/L苦参碱组(81.6±2.4)%,5%二甲基亚砜 2mg/L苦参碱组(84.7±2.8)%,5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组(89.6±3.4)%,5%二甲基亚砜 10mg/L苦参碱组(86.9±1.6)%,P>0.05]。②复苏后5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组肝细胞完整性恢复快,肝细胞生长旺盛,细胞膜完整,胞浆内有丰富颗粒,核仁清楚,与未冻存组肝细胞形态相似。③复苏后L-02人肝细胞系培养上清液尿素含量、上清液白蛋白含量5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组明显高于其他处理组,与对照组无显著差异。结论:①苦参碱对L-02人肝细胞液氮冻存有保护作用,6mg/L苦参碱是最好的浓度。②苦参碱、二甲基亚砜有协同作用,5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱联合冻存保护体系显著提高L-02人肝细胞系的冻存质量。

Effect of opitmal-concentration matrine combined with cryoprotectant on the cryopreservation of immortalized L-02 hepatocytes