| 金黄色葡萄球菌肠毒素A基因克隆及表达 |
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| 引用本文： | 陈悦,倪培华,吴洁敏. 金黄色葡萄球菌肠毒素A基因克隆及表达[J]. 上海医学检验杂志, 2006, 0(2) |
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| 作者姓名： | 陈悦 倪培华 吴洁敏 |
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| 作者单位： | 上海市临床检验中心 上海200126(陈悦)，上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系 上海200025(倪培华，吴洁敏) |
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| 基金项目： | 北京市科委科技计划项目(H020920020190) |
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| 摘 要： | 目的对金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(SEA)进行克隆、鉴定与表达,为制备单抗、诊断试剂及进一步深入研究SEA的功能奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增SEA基因,将扩增的产物连接于测序载体pMD18-T上,经测序反应确定无误,酶切后将SEA基因与原核表达载体pET42b( )构建表达SEA的重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,经双酶切鉴定后,再转化入表达宿主大肠杆菌BL21菌株内,对转化菌株进行诱导后,破菌,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。结果构建了表达载体pET42b( )-SEA,并获得高效表达,表达的蛋白质相对分子质量为27 000,重组蛋白(rSEA)在37℃、25℃经异丙基硫化-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导时均以包涵体形式存在。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,为制备单抗、诊断试剂及其致病机制研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 金黄色葡萄球菌肠毒素A 原核表达载体 克隆 表达 |
The cloning and expression of staphylococcal enterotoxin A gene from Staphylococcus aureus |
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| CHEN Yue,NI Peihua,WU Jiemin. The cloning and expression of staphylococcal enterotoxin A gene from Staphylococcus aureus[J]. Shanghai Journal of Medical Laboratory Sciences, 2006, 0(2) |
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| Authors: | CHEN Yue NI Peihua WU Jiemin |
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| Affiliation: | CHEN Yue,NI Peihua,WU Jiemin. Shanghai Centre for Clinical Laboratory,Shanghai 200126,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Staphylococcal enterotoxins A Prokaryotic expression Cloning Expression |
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