甲状旁腺激素通过NF-κB诱导人近曲小管上皮细胞结缔组织生长因子表达

目的 观察甲状旁腺激素（PTH）对人肾小管上皮细胞分泌结缔组织生长因子（CTGF）的影响，并探讨其信号传导通路及NF-κB在此过程中的作用。 方法 应用荧光实时定量PCR、Western印迹技术，观察PTH诱导人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞CTGF mRNA和蛋白合成情况；从转录水平探讨PTH对CTGF基因启动子活性的调控作用。采用凝胶迁移实验（EMSA）技术检测PTH刺激HK-2细胞后NF-κB的DNA结合能力；NF-κB抑制剂PDTC阻断信号通路以明确PTH发挥作用的信号途径。 结果 HK-2细胞有基础量的CTGF mRNA表达和蛋白合成，PTH刺激后其表达及合成量显著增加。PTH最佳刺激浓度是10－10 mol/L，最佳刺激时间是72 h。10－10 mol/L PTH作用HK-2细胞12 h后，荧光素酶活性显著高于未刺激组（1.8884±0.0780比0.9891±0.0300，P ＜ 0.01）。正常情况下，胞核内NF-κB处于无活性状态，PTH刺激HK-2细胞后，NF-κB的DNA结合能力明显增强，10－10 mol/L PTH作用30 min时NF-κB活性达到高峰；而后随PTH浓度和作用时间增加，NF-κB活性有所下降。PDTC预处理HK-2细胞后，PTH诱导细胞CTGF mRNA表达显著低于PTH组（0.33±0.05比3.84±0.68，P ＜ 0.05），CTGF蛋白表达亦显著低于PTH组（0.56±0.23比3.76±0.54，P ＜ 0.01）；PDTC亦显著抑制CTGF基因启动子活性，其萤火虫荧光素酶相对活性显著低于PTH组（1.1942±0.0107比1.8884±0.0780，P ＜ 0.01）。 结论 PTH可诱导HK-2细胞高表达CTGF，且在一定范围内呈时间、剂量依赖，其作用可能是通过NF-κB信号通路来实现的。