地高辛标记的小鼠β—1,4—半乳糖基转移酶IRNA探针的制备和应用 |
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引用本文: | 沈爱国,龚蕾蕾,丁斐,严美娟,王汉洲,顾建新.地高辛标记的小鼠β—1,4—半乳糖基转移酶IRNA探针的制备和应用[J].神经解剖学杂志,2003,19(4):365-368. |
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作者姓名: | 沈爱国 龚蕾蕾 丁斐 严美娟 王汉洲 顾建新 |
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作者单位: | [1]南通医学院,江苏省神经再生重点实验室,南通226001 [2]复旦大学上海医学院基因研究中心,上海200032 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(No.30300099),江苏省自然科学基金(BK2003035),江苏省教育厅自然科学项目(O3KJB180109)资助项目 |
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摘 要: | 为了制备小鼠β—1,4—半乳糖基转移酶I(β—1,4—galactosyltransferase I,β—1,4—GalT—I)地高辛标记的RNA探针以探讨β—1,4—GalT—I mRNA在坐骨神经组织的表达定位,本研究用提取的小鼠脑总RNA,采用RT—PCR方法,得到β—1,4—GalT—I的DNA片断,将其克隆到pGEM—T载体;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β—1,4—GalT—IRNA探针;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度;最后应用该探针,通过原位杂交的方法,分析β—1,4—GalT—ImRNA在小鼠坐骨神经的表达。结果:构建了β—1,4—GalT—I/pGEM—T质粒,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β—1,4—GalT—IRNA探针,应用该探针发现β—1,4—GalT—I在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明,制备的地高辛标记的正、反义β—1,4—GalT—-RNA原位杂交探针可特异地检测β—1,4—GalT—ImRNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β—1,4—GalT—I在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。
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关 键 词: | 地高辛标记 小鼠 β—1,4—半乳糖基转移酶I RNA探针 RNA原位杂交探针 RT—PCR |
修稿时间: | 2003年1月6日 |
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