| 反转录病毒载体介导转化生长因子β1基因体外转染兔膝关节软骨细胞的表达 |
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| 引用本文： | 林树忠,刘君,向川,卫小春. 反转录病毒载体介导转化生长因子β1基因体外转染兔膝关节软骨细胞的表达[J]. 中国神经再生研究, 2010, 14(2): 214-217 |
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| 作者姓名： | 林树忠 刘君 向川 卫小春 |
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| 作者单位： | 太原市中心医院骨科，山西省太原市 030009,太原市中心医院骨科，山西省太原市 030009,山西医科大学第二医院骨科，山西省太原市 030001,山西医科大学第二医院骨科，山西省太原市 030001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30500 515)，山西省自然科学基金项目(2006021045) |
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| 摘 要： | 背景：将功能基因片段整合到基因载体内，再将基因载体转染入靶细胞中或转染入关节腔内，通过转基因的靶细胞持续大量分泌功能基因产物，在一个较长的时期内保持局部治疗浓度，可修复关节软骨损伤。目的：以重组反转录病毒载体介导转化生长因子β1体外转染兔膝关节软骨细胞，观察其表达情况及其对软骨细胞生物学性状的影响。方法：采用胰酶消化法分离培养兔软骨细胞。载体经PLNCX2 Hind Ⅲ/Not Ⅰ双酶切、去磷酸化后，与载体pDsRed2双酶切得到大的部分多克隆位点和RFP基因连接，构建PLNCX2-RFP。转化生长因子β1基因从PGEMT-TGF中扩增，经双酶切后与PLNCX¬2-RFP连接，构建PLNCX2-TGFβ1-RFP。包装反转录病毒载体，并检测病毒上清滴度。将培养的兔膝关节软骨细胞分组转染：对照组(不做任何转染)、转染PLNCX2组、转染PLNCX2-TGFβ1-RFP组，持续筛选2周，观察细胞变化。收集稳定转染的细胞上清液，以NO检测试剂盒检测基因转染对软骨细胞的影响，以ELISA法检测细胞培养上清液中人转化生长因子β1表达。结果与结论：重组基因PLNCX2-TGFβ1-RFP经酶切鉴定测序TGFβ1、RFP、序列均正确，表明构建成功预期的真核表达载体PLNCX2- TGFβ1-RFP。转染到包装细胞并筛选培养后，病毒滴度为1×106 CFU。稳定转染软骨细胞后可观察到红色荧光，证明转染成功。持续筛选2周，散在贴壁细胞形成阳性克隆，逐渐弥漫融合，并有细胞簇出现，双核多见，细胞增生活跃。转染PLNCX2-TGFβ1-RFP组NO浓度高于对照组、转染PLNCX2组(P < 0.05)，对照组、转染PLNCX2组间差异无显著性意义。对照组与转染PLNCX2¬组均无转化生长因子β1表达，转染PLNCX2-TGFβ1-RFP组转化生长因子β1质量浓度为(28.08±3.73) ng/L。提示反转录病毒载体PLNCX2介导的人转化生长因子β1能有效转染到兔膝关节软骨细胞并获得稳定表达，同时转染后的软骨细胞增生活跃。
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| 关 键 词： | 反转录病毒；转化生长因子β1；转染；基因表达；软骨细胞；ELISA；软骨组织工程 |
Expression of articular chondrocytes in rabbits transfected by retroviral vector-mediated transforming growth factor beta 1 gene in vitro |
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| Lin Shu-zhong,Liu Jun,Xiang Chuan and Wei Xiao-chun. Expression of articular chondrocytes in rabbits transfected by retroviral vector-mediated transforming growth factor beta 1 gene in vitro[J]. Neural Regeneration Research, 2010, 14(2): 214-217 |
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| Authors: | Lin Shu-zhong Liu Jun Xiang Chuan Wei Xiao-chun |
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| Affiliation: | Department of Orthopedics, Taiyuan Central Hospital, Taiyuan 030009, Shanxi Province, China,Department of Orthopedics, Taiyuan Central Hospital, Taiyuan 030009, Shanxi Province, China,Department of Orthopedics, Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China,Department of Orthopedics, Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China |
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