鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因在大肠杆菌中的表达

目的构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体，并且在大肠杆菌中表达。方法将本室构建的pMD-Mz5-7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET-28b( )载体上，构建成原核表达载体pET-28b-Mz5-7，酶切鉴定正确后，在Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达，并经SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET-28b-Mz5-7，IPTG诱导表达该融合蛋白，SDS-PAGE电泳表明，其能表达一分子质量约为37ku的融合蛋白，与预测分子质量相符，最佳反应条件为1mol／LIPTG诱导4h后表达量最高。薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18％，Western blotting结果显示，表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别，说明该融合蛋白具有很好的反应原性。结论在原核细胞融合表达Mz5-7成功，为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础。