| 摘 要： | 目的探讨以β淀粉样蛋白(Aβ)42为靶抗原筛选人源天然单链抗体(sc Fv)噬菌体抗体库中的特异性抗体对阿尔茨海默病(AD)模型鼠中淀粉样沉积的影响。方法以Aβ42抗原包被免疫管,对人源天然sc Fv噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮吸附-洗脱-扩增淘选富集,制备单克隆噬菌体抗体颗粒,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测sc Fv的结合活性,得到一株阳性克隆sc Fv23。采用Western印迹和免疫组化的方法检测了sc Fv23与Aβ42单体、寡聚体、纤维和鼠脑中Aβ沉积的结合能力。并通过甲氮甲唑蓝(MTT)法检测sc Fv23对Aβ42寡聚体引起细胞毒性的影响,同时采用硫黄素-T荧光法(Th T-F)测定sc Fv23对Aβ42聚集形成纤维的影响。最后,通过体内实验检测了sc Fv23对AD鼠模型脑中Aβ42沉积的影响。结果通过对人源天然sc Fv噬菌体抗体库进行筛选得到一株与Aβ42具有高亲和力的克隆sc Fv23。实验发现sc Fv23可以特异性识别Aβ42寡聚体,纤维聚集体和鼠脑中Aβ42沉积,但是不能与Aβ42单体特异性结合。根据体外实验结果,sc Fv23可以有效抑制Aβ42寡聚体所诱导的细胞死亡,并且sc Fv23可以抑制Aβ42纤维聚集体的形成。体内实验结果发现,sc Fv23可以有效清除AD鼠模型中Aβ42沉积。结论通过噬菌体文库筛选得到的sc Fv23能够特异性识别脑组织中的淀粉样沉积,并且有效抑制转基因鼠中淀粉样沉积的形成。体外实验表明sc Fv23可以有效抑制Aβ42寡聚体所诱导的细胞毒性。特异性识别Aβ42的sc Fv可能会成为治疗AD的一种有效策略。
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