| 靶向载脂蛋白M基因小干扰RNA表达载体构建及其功能 |
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| 引用本文： | 黄刚,祝成亮,潘峰,刘芳. 靶向载脂蛋白M基因小干扰RNA表达载体构建及其功能[J]. 中国动脉硬化杂志, 2007, 15(5): 345-348 |
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| 作者姓名： | 黄刚 祝成亮 潘峰 刘芳 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学医院,湖北省武汉市,430074
2. 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室,湖北省武汉市,430072 |
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| 摘 要： | 目的设计和构建载脂蛋白M基因特异性的小干扰RNA体内表达载体,筛选抑制载脂蛋白M表达的有效小干扰RNA,并初步探讨载脂蛋白M的功能。方法以载脂蛋白M为目的基因,以产生小干扰RNA质粒载体pSilencerTM2.1-U6为表达模板,细胞内转录合成4条小干扰RNA,并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-载脂蛋白。将重组质粒载体plucF-载脂蛋白与产生小干扰RNA的质粒pSilencerTM2.1-U6共转染293T细胞,定量测量荧光素酶活性,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效小干扰RNA,然后将小干扰RNA转染L-02,逆转录聚合酶链反应检测载脂蛋白M mRNA的表达,进一步证实小干扰RNA对载脂蛋白M表达的抑制效果,酶联免疫吸附法检测有效小干扰RNA对载脂蛋白AⅠ、载脂蛋白B和载脂蛋白E合成和分泌的影响。结果合成的4条小干扰RNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为86%和91%,并特异性抑制肝细胞载脂蛋白M mRNA的表达;有效小干扰RNA能够有效抑制载脂蛋白AⅠ合成和分泌(P<0.05),而载脂蛋白B和载脂蛋白E的含量无明显改变(P>0.05)。结论成功构建并筛选到针对载脂蛋白M基因表达的有效小干扰RNA质粒,为研究冠心病的发病机制奠定基础。
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| 关 键 词： | 生物工程学 RNA干扰 载脂蛋白M 小干扰RNA 表达载体 基因表达 冠心病 |
| 文章编号： | 1007-3949（2007）15-05-0345-04 |
| 收稿时间： | 2006-12-04 |
| 修稿时间： | 2007-03-25 |
Construction and Functional Analysis of Short Interfering RNA Expression Vectors of Targeting Gene Apolipoprotein M |
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| HUANG Gang,ZHU Cheng-Liang,PAN Feng,and LIU Fang. Construction and Functional Analysis of Short Interfering RNA Expression Vectors of Targeting Gene Apolipoprotein M[J]. Chinese Journal of Arteriosclerosis, 2007, 15(5): 345-348 |
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| Authors: | HUANG Gang ZHU Cheng-Liang PAN Feng and LIU Fang |
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| Affiliation: | 1. Hospital of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074; 2. College of Life Sciences, State Key Laboratory of Virology, Wuhan University, Wuhan 430072, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA Interfering Apolipoprotein M Short Interfering RNA Expression Vectors Gene Expression Coronary Heart Disease |
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