三氯乙酸染毒对肝L-02细胞的增殖作用及对DNA甲基化水平的影响

目的 检测三氯乙烯(TCE)主要代谢产物三氯乙酸(TCA)对人肝L-02细胞染毒24 h后的增殖作用,以及对DNA总体甲基化水平的影响,探索TCE对肝L-02细胞的表型遗传毒性.方法 选择0.1-0.9 mmol/L浓度TCA作为合适的染毒剂量对肝L-02细胞染毒24 h后分别进行下列试验:以CCK-8试剂盒观测细胞的生长曲线;以抗5-mC抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化总体水平(代A 0.9 mmol/L染毒24 h);以流式细胞仪(FCM)检测其对细胞周期的影响及凋亡情况;提取细胞DNA进行琼脂糖电泳分析其对DNA的损伤作用.以上试验必要时设置5-氮杂胞苷(5-aza-dC5 μmol/L)处理的L-02细胞为基因组DNA低甲基化的对照以及肝癌细胞作为细胞周期分析的对照.结果 TCE在0.1～0.9 mmol/L浓度下染毒24 h后可以促进肝L-02细胞生长,并在0.9 mmol/L浓度作用下24 h可致肝L-02细胞DNA总体甲基化水平降低,荧光强度和正常细胞比较明显减弱;细胞周期分析发现TCA处理24 h后再用正常培养基继续培养24 h后可使细胞S G2期中细胞比例增加(与肝癌细胞接近);DNA梯状电泳分析未发现DNA损伤性改变.结论 TCA染毒24 h可促进细胞生长,可诱导基因组DNA低甲基化,并造成细胞周期的改变.提示TCA对肝细胞的早期细胞毒性作用与表型遗传机制有关.

Short-term trichloracetic acid treatment induced the hepatic L-02 cells proliferation and DNA hypomethylation in human hepatic L-02 cells