POLH对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的　探究DNA聚合酶η（POLH）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的防御机制。方法　以年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织和H₂O₂处理的晶状体上皮细胞系SRA01/04为研究对象，分别通过RT-PCR和免疫印迹实验验证POLH的表达并筛选H₂O₂最佳作用浓度用于后续实验，将培养的SRA01/04细胞分为H₂O₂组、H₂O₂+HA组和H₂O₂+OV-POLH组，采用RT-PCR和免疫印迹实验检测POLH mRNA和蛋白表达情况，免疫荧光法检测DNA氧化损伤标志物以及TUNEL实验检测细胞凋亡变化，免疫印迹实验检测细胞中BAX、BCL-2、Nrf2和Keap1蛋白表达。结果　RT-PCR结果显示，与透明晶状体前囊膜（1.00±0.22）相比，年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织中POLH mRNA相对表达量明显下降（0.38±0.62）（P<0.000 1）。RT-PCR和免疫印迹实验均显示，200 μmol·L^-1 H₂O₂处理的SRA01/04细胞中POLH表达量最低；TUNEL实验检测结果显示， 200 μmol·L^-1 H₂O₂处理后细胞的凋亡明显增加。RT-PCR和免疫印迹实验结果显示，与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比，H₂O₂+OV-POLH组SRA01/04细胞中POLH表达量显著升高（P<0.000 1）。免疫荧光染色结果显示，与H₂O₂+HA组相比，H₂O₂+OV-POLH组细胞的γH2A染色明显下降。免疫印迹实验检测结果显示，与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比，H₂O₂+OV-POLH组细胞促凋亡蛋白BAX表达量明显下降，而抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显升高（均为P<0.01）；与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比，H₂O₂+OV-POLH组细胞Keap1蛋白水平明显下降，而转录调控蛋白Nrf2表达明显升高（均为P<0.01）。结论　过表达POLH可通过增强DNA损伤修复功能抑制H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞凋亡，其抑制氧化应激机制可能与Nrf2-Keap1-ARE通路有关。