温阳散结汤含药血清通过NF-κB通路调控肿瘤相关巨噬细胞极化对Lewis肺癌的影响

目的:观察温阳散结汤对 Lewis 肺癌小鼠肿瘤生长及瘤组织中巨噬细胞M2型极化的影响，并探索其调控NF-κB信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2型极化，对Lewis肺癌细胞侵袭、迁移能力的影响。方法:建立C57BL/6小鼠 Lewis 肺癌移植瘤模型，温阳散结汤干预14 d 后观察小鼠瘤重和肺转移灶，计算肺转移抑瘤率，免疫组化染色检测小鼠瘤组织中巨噬细胞M2型表面标志物 CD206 的表达；温阳散结汤灌胃SD大鼠制备含药血清，采用IL-13干预RAW264.7小鼠巨噬细胞建立巨噬细胞M2型极化模型，CCK-8法检测温阳散结汤含药血清对巨噬细胞增殖的影响，流式细胞术和Western-blot检测 CD206的表达，RT-PCR检测巨噬细胞M2型标志基因的mRNA表达，ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-10、TGF-β 和TNF-α 的水平变化，Western-blot检测氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、核因子-κB p65(NF-κB p65)和磷酸化核因子-κB p65（pNF-κB p65）的蛋白表达；收集温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基，将其作用于Lewis肺癌细胞，通过Transwell侵袭迁移实验检测Lewis 肺癌细胞的侵袭和运动迁移能力。结果:温阳散结汤干预后，明显减少了小鼠瘤重和肺转移灶数，并抑制了瘤组织CD206的阳性表达（P<0.05）；温阳散结汤含药血清干预后，IL-13诱导的M2型巨噬细胞中F4/80+CD206+的细胞比例和CD206蛋白表达明显减少，MRC1、Arg1、Ym1的mRNA表达水平显著降低，细胞中TNF-α、IL-1β的含量明显升高，IL-10、TGF-β的含量明显降低，同时明显下调了细胞PPARγ、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白表达及pNF-κB p65/NF-κB p65比值（均P<0.05）；温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基干预后，Lewis肺癌细胞迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论:温阳散结汤具有抑制肺癌肿瘤生长和转移的作用，其作用机制可能与调节NF-κB通路，抑制IL-13诱导的RAW264.7细胞M2型极化，从而抑制Lewis肺癌细胞侵袭和迁移能力相关。