ZBTB5基因真核表达质粒的构建及其在HEK 293T细胞中的表达

目的构建ZBTB5基因的真核表达质粒,并检测其在细胞内的表达。方法以pET-28a(+)-ZBTB5质粒为模板,以ZBTB5全长编码基因特异性引物进行PCR扩增,将ZBTB5全长基因插入至pcDNA3.1-GFP真核表达载体构建重组pcDNA3.1-ZBTB5-GFP质粒。将该重组质粒双酶切及测序鉴定后,转染至HEK 293T中,荧光显微镜下及Western blot分别检测GFP和ZBTB5在细胞中的表达。同时设置pcDNA3.1和pcDNA3.1-GFP载体为对照。结果酶切及测序证实成功构建了真核表达重组载体pcDNA3.1-ZBTB5-GFP。荧光显微镜下可见GFP的表达,Western blot检测到融合蛋白ZBTB5-GFP的表达。结论成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ZBTB5-GFP,为探讨其进一步的功能奠定基础。