人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶的可溶性表达及抗血清反应模式 |
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引用本文: | 谢飞,涂向东,兰风华,朱忠勇.人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶的可溶性表达及抗血清反应模式[J].中华检验医学杂志,2004,27(12):857-860. |
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作者姓名: | 谢飞 涂向东 兰风华 朱忠勇 |
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作者单位: | 南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科福州,350025 |
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摘 要: | 目的克隆表达重组人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清,探讨建立ALT1特异性检测方法思路。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA,插入pGEX-2T,构建原核表达载体pGEX-2T—ALT1,并转人大肠杆菌进行表达。SDS-PAGE,活力测定和活性染色鉴定表达产物。表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1,重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析。结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体。SDS-PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性。抗ALT1血清除识别重组ALT1外,还可识别天然蛋白和重组ALT2。结论重组人ALT1得到高效可溶性表达。用目前方法制备的抗血清特异性不高,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体,以避免交叉反应引起的假性升高。
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关 键 词: | ALT 丙氨酸氨基转移酶 抗血清 天然 蛋白 可溶性表达 假性 活性染色 克隆表达 特异性识别 |
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