| microRNA-7真核表达载体的构建及其对细胞增殖能力的影响 |
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| 引用本文： | 许英晨,周军年,曾泉,袁红丰,岳文,裴雪涛.microRNA-7真核表达载体的构建及其对细胞增殖能力的影响[J].军事医学科学院院刊,2010,34(6):523-527,535. |
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| 作者姓名： | 许英晨 周军年 曾泉 袁红丰 岳文 裴雪涛 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室,北京100850 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的构建miR-7真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响。方法以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体。将构建好的载体瞬时转染入293FT细胞中,利用RT-PCR技术对转染前后293FT细胞中miR-7的表达水平进行检测。将pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体瞬时转染入乳腺癌细胞系MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后细胞增殖能力的变化。结果构建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定结果正确,实时定量RT-PCR结果表明,与转染pHRS-1cla-CMV-EGFP对照载体细胞相比,转染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体72 h后的293FT细胞成功地过表达miR-7达76.8倍。CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力显著性下降（P〈0.05）。结论成功构建了pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体,瞬时转染后细胞可以有效地高表达miR-7,同时证明过表达miR-7可以使细胞的增殖能力受到明显抑制。
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| 关 键 词： | 微小RNAs miR-7 pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP真核表达载体 细胞增殖 |
Construction of microRNA-7 eukaryotic expression vector and its effect on cell proliferation |
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| XU Ying-chen,ZHOU Jun-nian,ZENG Quan,YUAN Hong-feng,YUE Wen,PEI Xue-tao.Construction of microRNA-7 eukaryotic expression vector and its effect on cell proliferation[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2010,34(6):523-527,535. |
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| Authors: | XU Ying-chen ZHOU Jun-nian ZENG Quan YUAN Hong-feng YUE Wen PEI Xue-tao |
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| Institution: | (Stem Cell and Regenerative Medicine Lab,Beijing Institute of Transfusion Medicine,Beijing 100850,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | microRNAs miR-7 pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP eukaryotic expression vector cell proliferation |
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