| 结核分枝杆菌RpfA蛋白的原核表达、鉴定和纯化 |
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| 引用本文： | 徐蕾,帖儒修,王爽,王瑜伟,李娜,何永林,蒋仁举. 结核分枝杆菌RpfA蛋白的原核表达、鉴定和纯化[J]. 重庆医科大学学报, 2008, 33(5): 560-563 |
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| 作者姓名： | 徐蕾 帖儒修 王爽 王瑜伟 李娜 何永林 蒋仁举 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室;重庆医科大学免疫学教研室,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化.方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基因(1 224bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32aα( )载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定.测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由盯启动子调控表达了RpfA蛋白;利用His-tag in-gel Stain对表达蛋白进行鉴定,最后对目的蛋白进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和His-tag in-gel Stain鉴定均发现66ku处有特异性蛋白条带.结论:成功克隆并构建了RpfA基因的重组表达质粒pET32 α( )-RpfA,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 RpfA 克隆 表达 纯化 |
| 文章编号： | 0253-3626(2008)05-0560-04 |
| 修稿时间： | 2007-10-26 |
Expression, identification and purification of the resuscitation-promoting factor A of mycobacterium tuberculosis |
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| XU Lei. Expression, identification and purification of the resuscitation-promoting factor A of mycobacterium tuberculosis[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2008, 33(5): 560-563 |
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| Authors: | XU Lei |
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