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NHERF-1介导雌激素调节PTEN蛋白表达的研究
作者姓名:陈鹏 贺俊崎
作者单位:首都医科大学生物化学与分子生物学系,北京100069
摘    要:目的:研究雌激素调节PTEN蛋白表达的分子机制。方法:利用蛋白质芯片筛选PTEN的结合蛋白,发现了NHERF-1与PTEN的相互作用;应用GST pull-down、over-lay和免疫共沉淀等方法确认了其二者的相互作用。通过瞬时转染、免疫印迹分析、RT-PCR、RNAi以及蛋白降解速度检测等方法检测NHERF-1对细胞内PTEN稳定性的影响。结果:发现了PTEN与NHERF-1的相互作用,该相互作用是通过PTEN羧基末端与NHERF-1的第一个PDZ结构域相结合而实现的。将PTEN羧基末端的4个氨基酸分别突变为丙氨酸,都会明显抑制二者的结合。利用免疫共沉淀确认了细胞内完整的PTEN与NHERF-1蛋白分子的相互作用。发现NHERF-1的表达可以提高细胞内PTEN的蛋白表达量,而其mRNA表达水平没有增加。利用环己酮抑制新蛋白合成后,检测到NHERF-1的表达可以抑制PTEN蛋白的降解速度;RNAi抑制内源性NHERF-1的表达导致IYFEN的蛋白表达量显著下降。雌激素可以明显增高NHERF-1与PTEN的蛋白表达,RNAi干扰NHERF-1表达后,雌激素不再调节PTEN的蛋白的表达。结论:PTEN与NHERF-1可以特异结合。NHERF-1与PTEN结合显著提高PTEN蛋白的稳定性;雌激素并不直接调节PTEN蛋白的表达而是通过诱导NHERF-1的表达,引起PTEN蛋白稳定性的增强而导致PTEN蛋白含量的提高。

关 键 词:雌激素 PTEN蛋白 PTEN稳定性 分子机制
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