以重组CD74胞外片段抑制巨噬细胞移动抑制因子（MIF）功能域活性

目的：巨噬细胞移动抑制因子（MIF）第50-65位氨基酸残基（MIF50-65）是其生物活性功能域。MIF需与Ⅱ型穿膜蛋白CD74的胞外片段结合后引发信号传导反应。本文拟筛选能特异结合MIF50-65的CD74胞外截短体片段，并研究重组该CD74截短体对MIF50-65活性的抑制作用。方法：利用酵母双杂交实验筛选MIF50-65与CD7473-149、CD74109-149、CD74109-232、CD7473-232中特异结合的CD74截短体。利用原核表达系统，在大肠杆菌中诱导表达重组CD74截短体多肽。用GSTrap亲合柱纯化重组蛋白，通过体外血管生成实验鉴定重组CD74截短体对MIF的阻断作用。结果：只有MIF50-65与CD7473-232共转化的酵母可以在SD／-Leu-His-Trp-Ade培养基上生长，且α-x-gal底物反应为蓝色。构建了重组质粒pGEX-4T-CD7473-232，经IPTG诱导后特异表达出可溶性的重组蛋白。重组CD7473-232能特异地阻断MIF的促血管生成作用。结论：CD7473-232能与MIF50-65特异结合，并对MIF生物活性有抑制作用。