分化调节基因在全反式维甲酸诱导干细胞分化过程中的变化

目的：观察急性早幼粒细胞白血病治疗药物全反式维甲酸（at-RA）诱导P19胚胎癌性干细胞分化过程中分化调节基因的变化。方法：P19细胞来源于小鼠畸胎瘤。未分化P19细胞通过at-RA诱导和悬浮培养4天，聚集形成拟胚体（EB4），继续贴壁培养。于at-RA诱导P19细胞分化过程各时间点，收获细胞总RNA，进行RT-PCR和Real-TimeRT-PCR检测；收获细胞总蛋白用于Western Blot检测；同时收获拟胚体用于免疫组织化学检测。结果：在P19细胞分化过程中，分化调节基因Nanog、Oct4和CoAA mRNA相继迅速降低，继而CoAM、Sox6、MAP2、GFAP的mRNA顺序升高。CoAA基因通过选择性剪切产生两种功能相互拮抗的异构体CoAA和CoAM。在at-RA诱导的P19细胞分化过程中，CoAA和CoAM mRNA的变化为瞬时效应，二者分别于拟胚体形成时达最低点和最高点，并于贴壁培养后又很快回升和下降到分化前水平。mRNA水平变化和蛋白水平变化存在一定差异，但仍可看出CoAM蛋白在EB4显著升高。CoAA主要表达于拟胚体外周细胞，而CoAM则主要表达于拟胚体中央空腔（Cavity）细胞，且中央空腔细胞强烈表达活性Caspase-3。结论：在干细胞分化拟胚体形成时，CoAA基因发生了选择性剪切转换一由CoAA表达为主，转换为CoAM为主要剪切产物。而且在at-RA诱导P19细胞形成的拟胚体中，CoAM的表达部位与凋亡信号通路关键酶Caspase-3一致，二者均表达于拟胚体中央空腔细胞中，而COAA的表达则位于拟胚体的外围。因而，CoAA和CoAM两中异构体在拟胚体中的分布特点及其相拮抗的生理功能，可能参与决定拟胚体中细胞的命运一分化或凋亡。