HPVl8 E7联合SLC基因疫苗的构建及在真核细胞中的表达 |
| |
作者姓名: | 朱平 曾凡惠 张昌菊 柳长柏 刘朝奇 王艳林 雷小敏 |
| |
作者单位: | [1]三峡大学医学院免疫学重点学科 [2]三峡大学分子生物学研究所 [3]三峡大学仁和医院妇产科,宜昌443002 |
| |
摘 要: | 目的:构建人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)18型E7联合小鼠次级淋巴组织趋化因子(Secondary lymphoid tissue chemokine,SLC)真核共表达基因,以获得高效性治疗HPVl8感染及相关肿瘤的DNA疫苗。方法:分别以HPVl8型的中国野毒株、pDsRed2-N1-SLC为模板,利用PCR克隆技术制备HPVl8E7和SLC基因,分别双酶切后胶回收获得HPVl8E7、SLC基因片段,分别插入到真核表达载体pIRES的多克隆位点B(MCSB)和多克隆位点A(MCSA)中,构建pIRES-E7-SLC真核共表达质粒。酶切及核酸序列分析鉴定质粒。脂质体转染人脐静脉内皮细胞(ECV)细胞,以Western bolt方法鉴定真核表达质粒E7的表达,用ELISA的方法鉴定真核表达质粒SLC的表达。结果:酶切及核酸序列测定表明真核表达质粒pIRES-E7-SIC的成功构建。RT-PCR和Western-Blotting方法证实E7及SLC蛋白在真核细胞的正确表达。结论:成功地构建真核表达质粒plRES-E7-SLC,用它转染ECV细胞后,能表达E7和SLC蛋白,为下一步研究HPVl8感染及相关肿瘤疫苗奠定了基础。
|
关 键 词: | 人乳头瘤病毒18 肿瘤 脱氧核糖核酸疫苗 ECV细胞 |
本文献已被 维普 等数据库收录! |