| NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及功能鉴定 |
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| 引用本文： | 徐祥,梁华平,刘昕,李生茂,史海水,刘东擘,吴强,王正国. NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及功能鉴定[J]. 免疫学杂志, 2006, 22(2): 132-136 |
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| 作者姓名： | 徐祥 梁华平 刘昕 李生茂 史海水 刘东擘 吴强 王正国 |
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| 作者单位： | 1. 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042
2. 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 科技部科研项目;中国科学院资助项目;全军资助项目 |
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| 摘 要： | 目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7DNA-BD载体上,与GAL4DNA-BD融合,形成GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白;再以GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白为诱饵蛋白行酵母双杂交实验,自16肽随机肽库中筛选与NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用的多肽;最后选择性人工合成筛选获得的多肽,并进行EMSA实验检测相互作用多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。结果扩增获得了NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,并成功构建pGBKT7DNA-BD/p65BD载体。自1.28×107个酵母转化子中最终筛选获得5个阳性克隆,测序结果和同源氨基酸序列比对表明5个阳性多肽为p65BD新型相互作用多肽,其中4条多肽拥有一个共同的基序。EMSA实验结果表明合成的两条多肽对NF-κB的DNA结合活性均具有一定的抑制效应。结论经初筛、复选和假阳性鉴定,自16肽库中获得5个能与NF-κB p65亚基发生相互作用的新型多肽,并已证实其中两条多肽对NF-κB的DNA结合活性具有抑制效应。
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| 关 键 词： | NF-κB 酵母双杂交系统 随机多肽库 |
| 文章编号： | 1000-8861（2006）02-0132-05 |
| 收稿时间： | 2005-03-14 |
| 修稿时间： | 2005-05-23 |
Screening of oligopeptides interacted with DNA binding domain of NF-Κb p65 subunit and identification of their function |
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| XU Xiang,LIANG Hua-ping,LIU Xin,LI Sheng-mao,SHI Hai-shui,LIU Dong-bo,WU qiang,WANG Zheng-guo. Screening of oligopeptides interacted with DNA binding domain of NF-Κb p65 subunit and identification of their function[J]. Immunological Journal, 2006, 22(2): 132-136 |
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| Authors: | XU Xiang LIANG Hua-ping LIU Xin LI Sheng-mao SHI Hai-shui LIU Dong-bo WU qiang WANG Zheng-guo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | p65 |
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