MC3T3E1细胞分化过程中Cbfα1及相关基因的表达

目的 研究在小鼠前成骨细胞MC3T3E1诱导成骨过程中，总Cbfα1、Cbfα1两种亚型Cbfα1／P56、Cbfα1／P57及碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白和骨桥素在前成骨细胞成熟过程中的变化。明确Cbfα1、Cbfα1亚型及相关基因表达与成骨细胞分化的关系，探求与成骨细胞成熟更密切相关的Cbfα1亚型，为进一步的Cbfα1亚型研究提供基础。方法 MC3T3E1细胞在含β-甘油磷酸钠，抗坏血酸的培养基中培养22d，在细胞培养的不同时间（0，4，10，14，18，22d），用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶（ALP）活性；VanGieSon苦味酸酸性复红染色法染色细胞Ⅰ型胶原；茜素红染色观察矿化结节形成；半定量RT-PCR检测总Cbfα1mRNA及Cbfα1／P56、Cbfα1／P57mRNA和Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥索mRNA的表达；用Western-blot检测Cbfα1蛋白的表达。结果 MC3T3E1细胞在β-甘油磷酸钠存在的情况下，培养第18d开始出现矿化，第22dⅠ型胶原染色及茜素红染色均观察到明显矿化结节形成。随MC3T3E1细胞的分化，Cbfα1mRNA的表达量逐渐增高，Cbfα1／P57mRNA在第18和22d的表达量明显增高，Cbfα1／P56mRNA无变化。Cbfα1蛋白随MC3T3E1细胞的分化，表达量逐渐增高。同样，随MC3T3E1细胞分化，Ⅰ型胶原、骨钙素、骨桥素和骨涎蛋白mRNA的表达量逐渐增高。ALP活性0～10d逐渐增高，10d后逐渐下降。结论 在MC3T3E1细胞的分化过程中Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥素mRNA随MC3T3E1细胞的分化表达逐渐增高。Cbfα1 mRNA及Cbfα1蛋白的表达随细胞的分化逐渐增高，与其他成骨特异性基因的变化趋势一致，并以Cbfα1／P57mRNA亚型为主。Cbfα1／P57亚型的表达与成骨分化的关系更密切，在进一步的与成骨细胞分化有关的Cbfα1亚型研究应以Cbfα1／P57亚型为主。

Expression of core binding factor alpha 1 (Cbfα1) and related genes in MC3T3E1 cell line differentiation