| p α-MHC/EGFP小鼠胚胎干细胞株的构建及其向心肌细胞分化的观察 |
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| 引用本文： | 王治,戴秋艳,吴亚兰,徐国彤,李令杰,孙宝贵. p α-MHC/EGFP小鼠胚胎干细胞株的构建及其向心肌细胞分化的观察[J]. 上海交通大学学报(医学版), 2008, 28(8) |
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| 作者姓名： | 王治 戴秋艳 吴亚兰 徐国彤 李令杰 孙宝贵 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学,第一人民医院心内科,上海,200080
2. 中国科学院上海生命科学研究院/上海交通大学医学院健康科学研究所干细胞重点实验室,上海,200025 |
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| 摘 要： | 目的 构建含有心肌特异性基因肌球蛋白重链α(α-MHC)调控的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的载体并转染到小鼠胚胎干细胞(ESC),建立p α-MHC/EGFP小鼠ESC株,利用该细胞株可识别和纯化分化形成的心肌细胞. 方法 应用电穿孔技术将p α-MHC/EGFP载体转染到ESC,G418筛选10～12 d后收集G418抗性细胞克隆并采用悬滴法体外诱导向心肌分化.通过PCR扩增细胞克隆基因组EGFP片段,并在心肌分化过程中通过荧光显微镜观察EGFP的表达,鉴定p α-MHC/EGFP胚胎干细胞株的建立.细胞免疫组化法检测自发性搏动拟胚体(EB)中EGFP阳性区域心肌肌钙蛋白T的表达. 结果 G418抗性细胞克隆基因组中能够扩增EGFP片段;在心肌细胞分化过程中,荧光显微镜下能观察到EB局部出现自发性搏动的亮绿色细胞团;细胞免疫组化检测显示,EGFP阳性区域肌钙蛋白T表达阳性. 结论 成功构建了p α-MHC/EGFP胚胎干细胞株,该细胞株在分化为心肌细胞的同时表达EGFP,便于对心肌细胞进行识别和纯化.
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| 关 键 词： | 胚胎干细胞 绿色荧光蛋白 转染 心肌细胞 分化 小鼠 |
Construction of p α-MHC/EGFP murine embryonic stem cell clones and observation of its differentiation into cardiomyocytes |
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| WANG Zhi,DAI Qiu-yan,WU Ya-lan,XU Guo-tong,LI Ling-jie,SUN Bao-gui. Construction of p α-MHC/EGFP murine embryonic stem cell clones and observation of its differentiation into cardiomyocytes[J]. Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science, 2008, 28(8) |
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| Authors: | WANG Zhi DAI Qiu-yan WU Ya-lan XU Guo-tong LI Ling-jie SUN Bao-gui |
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