| 靶向bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和筛选 |
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| 引用本文： | 孙桦,李光明,刘博伟,胡俊杰,李定国.靶向bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和筛选[J].上海交通大学学报(医学版),2008,28(2). |
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| 作者姓名： | 孙桦 李光明 刘博伟 胡俊杰 李定国 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院新华医院消化内科,上海,200092 |
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| 摘 要： | 目的 构建能高效抑制肝星状细胞(HSCs)bcl-2表达的小发夹RNA(shRNA)重组质粒.方法 利用RNA干扰技术,设计有小发夹结构的3条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体psiRNA-hHlneo上构建重组质粒,予以酶切和测序鉴定.重组质粒转染HSC-T6细胞株,运用实时荧光定量PCR和Western blotting进行筛选鉴定.结果 酶切及测序鉴定表明,成功构建重组质粒shRNA1、shRNA2和shRNA3.实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,shRNA1和shRNA2转染后显著抑制HSC-T6中bcl-2 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),其中siRNA1的bcl-2表达抑制效率＞80%.结论 构建的重组质粒shRNA1能有效抑制HSCs中bcl-2的表达.实验为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了基础.
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| 关 键 词： | RNA干扰 bcl-2 重组质粒 肝星状细胞 |
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