| 人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定 |
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| 引用本文： | 程岚,束蓉,薛京伦,陈金中,田聆,方煜翔. 人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定[J]. 上海交通大学学报(医学版), 2008, 28(7) |
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| 作者姓名： | 程岚 束蓉 薛京伦 陈金中 田聆 方煜翔 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学,医学院第九人民医院口腔医学院牙周科,上海市口腔医学重点实验室,上海市口腔医学研究所,上海,200011
2. 复旦大学,生命科学学院遗传学研究所,遗传工程国家重点实验室,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的 构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白.方法 利用限制性内切酶EcoR I和Sal I将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定.选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm.经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm.结果 重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误.在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别.结论 成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm.大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 重组人釉原蛋白 原核表达载体 融合蛋白 |
Expression, purification and identification of human amelogenin prokaryote |
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