| 摘 要： | 目的:探讨二至丸抑制绝经后骨质疏松大鼠骨代谢紊乱的作用机制。方法:2月龄雌性清洁级SD大鼠60只,采用随机数字表随机分为假手术组15只与手术组45只。假手术组在双侧卵巢周围切除少许脂肪组织,手术组摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模后2周,再将手术组大鼠随机分为模型组、二至丸组与雌二醇组,每组15只。二至丸组和雌二醇组大鼠,分别用二至丸混悬液和戊酸雌二醇片混悬液灌胃;假手术组和模型组大鼠,用生理盐水灌胃;每日1次,连续灌胃12周。药物干预结束后,采用ELISA法检测大鼠血清中骨代谢标记物骨特异性碱性磷酸酶(bone alkaline phosphotase,BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate-resistant acid phosphatase-5b,TRACP-5b)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、组织蛋白酶K(cathepsin K,Cath-K)含量;并每组随机取3只大鼠的L_5椎体,以4%多聚甲醛固定,行骨密度(bone mineral density,BMD)及组织学检测;每组其余12只大鼠L_5腰椎以液氮保存,行骨代谢标记物mRNA表达的检测。并对各组检测结果进行比较。结果:(1)BMD检测结果。药物干预12周后,4组间腰椎BMD检测结果比较,差异有统计学意义(0.16±0.02)g·cm~(-2),(0.10±0.03)g·cm~(-2),(0.13±0.02)g·cm~(-2),(0.14±0.02)g·cm~(-2);F=5.800,P=0.005];假手术组、二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.001,P=0.024,P=0.010);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.123,P=0.236);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.701)。(2)组织学检测结果。药物干预12周后,假手术组腰椎骨小梁致密,分布均匀,排列规则,表面光滑,交织成网状,骨小梁间隙均匀。模型组腰椎骨小梁变细、分布稀疏、散乱、不连续,表面粗糙,完整性差,出现碎片、断裂等。二至丸组与雌二醇组腰椎骨小梁变细,数量减少,分布稀疏,排列较规则。4组间骨小梁面积百分比比较,差异有统计学意义(23.25±5.32)%,(11.82±3.87)%,(17.10±3.83)%,(18.08±2.59)%;F=8.144,P=0.001];模型组、二至丸组与雌二醇组低于假手术组(P=0.000,P=0.015,P=0.038);二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.034,P=0.014);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.677)。(3)骨代谢标记物血清含量检测结果。药物干预12周后,4组间血清BALP含量比较,差异有统计学意义(58.14±9.04)单位·L~(-1),(40.91±6.47)单位·L~(-1),(51.13±7.88)单位·L~(-1),(52.23±7.41)单位·L~(-1);F=5.239,P=0.008];假手术组、二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.001,P=0.034,P=0.012);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.133,P=0.286);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.645)。4组间血清TRACP-5b含量比较,差异有统计学意义(0.71±0.13)pg·mL~(-1),(0.98±0.22)pg·mL~(-1),(0.79±0.09)pg·mL~(-1),(0.77±0.07)pg·mL~(-1);F=3.874,P=0.025];假手术组、二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.004,P=0.038,P=0.022);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.320,P=0.459);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.795)。4组间血清MMP-9含量比较,差异有统计学意义(1.63±0.23)pg·mL~(-1),(2.01±0.35)pg·mL~(-1),(1.64±0.25)pg·mL~(-1),(1.58±0.18)pg·mL~(-1);F=3.507,P=0.034];假手术组、二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.021,P=0.023,P=0.009);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.972,P=0.699);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.673)。4组间血清Cath-K含量比较,差异有统计学意义(2.55±0.40)pg·mL~(-1),(4.06±0.87)pg·mL~(-1),(3.07±0.77)pg·mL~(-1),(2.73±0.69)pg·mL~(-1);F=5.539,P=0.006];假手术组、二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.001,P=0.024,P=0.004);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.217,P=0.671);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.408)。(4)骨代谢标记物mRNA表达检测结果。药物干预12周后,4组间BALPmRNA表达比较,差异有统计学意义(1.01±0.04),(0.62±0.10),(0.78±0.13),(0.83±0.13);F=14.482,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组低于假手术组(P=0.000,P=0.001,P=0.007);二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.015,P=0.002),二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.385)。4组间TRACP-5bmRNA表达比较,差异有统计学意义(0.98±0.04),(2.05±0.41),(1.67±0.26),(1.50±0.21);F=16.574,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组高于假手术组(P=0.000,P=0.000,P=0.003);二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.024,P=0.002);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.282)。4组间MMP-9mRNA表达比较,差异有统计学意义(1.00±0.06),(1.86±0.17),(1.51±0.32),(1.45±0.35);F=11.684,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组高于假手术组(P=0.000,P=0.002,P=0.007);二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.028,P=0.010);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.643)。4组间Cath-KmRNA表达比较,差异有统计学意义(0.99±0.03),(2.52±0.57),(1.85±0.27),(1.74±0.54);F=13.543,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组高于假手术组(P=0.000,P=0.002,P=0.005);二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.011,P=0.004);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.663)。结论:对于绝经后骨质疏松模型大鼠,二至丸和戊酸雌二醇片均可增加其骨密度和骨小梁数量;作用机制可能是通过促进BALP表达、抑制TRACP-5b、MMP-9与Cath-K表达,从而抑制骨代谢紊乱;两种药物的作用相当。
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