逆转录—半套式—聚合酶链反应单管法检测血清中HCV RNA

目的 探讨建立一种更简便，更特异灵敏的逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）单管法。方法 采用蜡隔将RT和PCR扩增2个独立的反应体系在1个Eppendoff(Ep)管中分隔开来，设计内外引物，优化反应体系及条件，使整个检测反应经高温启动继而连续封闭地完成。结果 在60例血透析患者血清中，33例（55％）抗－HCV－IgG阳性和27例抗－HCV－IgG阴性血清用单管RT－PCR分别检出28例（85％）和3例（9％）HCV RNA阳性，并对3份阳性PCR产物作核酸序列测定。本方法的检测灵敏度为10^2拷贝／ml。结论 RT－PCR单管法在保持高灵敏度的前提下，提高了特异性，具有简单高效，杜绝外源性污染等优点。