| TRPM2蛋白在大肠杆菌的表达纯化和多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 孙宏卫,罗海华,王妮,欧小利,温晓梨,姜勇,梅柱中. TRPM2蛋白在大肠杆菌的表达纯化和多克隆抗体制备[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2013, 29(5): 511-514 |
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| 作者姓名： | 孙宏卫 罗海华 王妮 欧小利 温晓梨 姜勇 梅柱中 |
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| 作者单位： | 南方医科大学病理生理教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东广州510515 |
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| 摘 要： | 目的 获得人瞬时受体电位M2(TRPM2)离子通道蛋白N末端的原核表达融合蛋白,制备兔抗人TRPM2多克隆抗体.方法 采用PCR扩增编码人TRPM2蛋白N末端l～334位氨基酸残基(在人与小鼠中高度保守)的cDNA序列,将其克隆至谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-3上.将原核表达重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导GST-TRPM2N融合蛋白的表达,并纯化获得相对分子质量(Mr)约70 000的GST-TRPM2融合蛋白.将此融合蛋白与弗氏完全佐剂混合后采用经典的4次免疫法免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,用Western blot法对该抗体进行鉴定.结果 通过PCR扩增获得编码TRPM2蛋白N末端的cDNA片段并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T3中,采用IPTG诱导、蛋白质的变性与复性纯化获得融合蛋白GST-TRPM2N,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备获得特异性抗TRPM2蛋白的多克隆抗体.结论 成功制备了特异性抗人TRPM2蛋白的多克隆抗体.
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| 关 键 词： | TRPM2 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 |
The expression and purification of TRPM2 protein in E.coli and preparation of its polyclonal antibody |
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