内毒素血症大鼠肠系膜淋巴循环动力学及iNOS抑制剂SMT作用的实验研究

本实验主要研究内毒素、iNOS抑制剂硫酸甲基异硫脲(SMT)对活体淋巴管运动及iNOS的表达的影响，探讨iNOS、iNOS抑制剂SMT在急性内毒素血症中对淋巴微循环的作用。动物选用雄性Wistar大鼠54只，体重200-300g。将动物分为3组control组(n＝18)股静脉一次推注生理盐水(5mL／kg体重)作对照。分别在注药后l、3、6h各处死6只；LPS组(n＝18)股静脉一次推注LPS(5mg／kg体重)，其它处理同control组；LPS+SMT组(n＝18)股静脉一次推注LPS(5　mg／kg体重)和SMT(10　mg／kg体重)；其它处理同control组。动物用20％乌拉坦(7ml／kg体重)肌肉注射麻醉。腹正中部开腹，取出肠系膜，找出一条理想的游离淋巴管，置于观察盒中，保温(32℃左右)，并定时于肠管上滴加37℃左右的台氏液以维持一定湿度，在倒置显微镜下观察并录像。将每只需观察6h的动物镜下先稳定5-10min，作为正常录像，再按分组注药，观察录像6h后，处死。根据录像资料，利用微机图像处理系统，定淋巴管、定部位测量实验用药前及用药后l、2、3、4、5、6h各时段各动物淋巴管管径的大小，求得平均口径(d)、最大舒张口径(b)、最小收缩管径(c)、淋巴管收缩频率(a)，计算淋巴管运动指数［收缩指数IndexI＝(b2-c2)／b2，总收缩活性指数IndexII＝(b2-c2)a／b2，淋巴管动力学指数LD-Index＝(b-C)100a／d2］。所有动物在处死后，取血静置，取血清，用一氧化氮试剂盒测定血清中NO合量。并取肠系膜进行免疫组化染色。结果(1)LPS组的收缩频率、运动指数均比注药前显著降低(P＜0.05)，免疫组化染色阳性细胞数明显增多(P＜0.05)。阳性细胞为巨噬细胞和内皮细胞。血浆NO合量显著升高(P＜0.01)。(2)SMT+LPS组的收缩频率、运动指数均与注药前相比，无显著差异(P＞0.05)。免疫组化染色阳性细胞数及血浆NO含量与LPS组相比，均显著降低(P＜0.01)。结果说明正常条件下，肠系膜淋巴管运动不但受自身节律的调节，还受NO的调节。LPS作用下，肠系膜淋巴管随时间延长明显扩张，运动减弱，渗出增多，与NO的生成量呈正相关。SMT能抑制iNOS的活性，内毒素血症早期应用选择性iNOS抑制剂，可维持淋巴循环于正常水平。内毒素血症中，由于iNOS过度表达，导致过量的NO产生，使淋巴管的运动异常。SMT由于能抑制iNOS，从而抑制了NO的过量产生，使淋巴管运动恢复。这可能为临床上淋巴管循环障碍及内毒素血症的治疗提供理论基础和实验依据。