转染胸苷磷酸化酶基因对5’-脱氧氟尿苷抑制结肠癌细胞的影响

目的探讨转染胸苷磷酸化酶（TP）cDNA对5’-脱氧氟尿苷（5＇-DFUR）抑制人结肠癌细胞LOVO作用的影响。方法将TPcDNA序列克隆以慢病毒表达载体包装后转染人结肠癌细胞LOVO（LOVO．TP组），另设空白对照组和LOVO．载体组。以流式细胞仪检测3组细胞转染效率，RT—PCR法检测3组细胞TPmRNA表达；Westernblot法检测转染前后TP蛋白水平；MTF法检测转染前后LOVO对5’-DFUR药物敏感性的变化；高效液相色谱法（HPLC）检测3组细胞转化不同浓度5’-DFUR生成5-FU量的情况。结果转染11P基因并传代5代后，LOVO细胞的转染效率在95％左右。转染TP基因后，LOVO．TP组的TPmRNA表达水平为空白对照组的（282．5＋86．8）倍（P〈O．01），而LOVO．载体组与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）；Westernblot检测显示，LOVO．TP组的TP蛋白表达明显高于对照组和LOVO．载体组。5＇-DFUR对LOVO细胞半数有效剂量（IC50）对照组为（1607．3~56．8）~mol／L，明显高于LOVO．TP组的（1087．7~89．1）μmol／L（P〈0．01）；而LOVO-染载体组为（1699．5~38．7）μmol／L，与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）。培养基中分别加入0、500、1000和2000μmol／L的5＇-DFUR后，对照组培养基中分别检出0、2．10、3．13和7．19μmol／L的氟尿嘧啶（5．FU）；而在LOVO．TP组的细胞培养基中则分别检出0、22．16、30．94和40．02μmol／L的5．FU；而LOVO-载体组的培养基中则几乎无5．Fu检出。结论转染TPcDNA能够明显提高LOVO细胞的TPmRNA及TP蛋白表达水平。使细胞外5’-DFUR转化为5-Fu增多．明显提高5’-DFUR对LOVO的细胞毒性作用。