| 巨细胞病毒IE2的红色靶基因与绿色荧光-慢病毒系统的建立及其对人神经干细胞的感染 |
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| 引用本文： | 焦丰叶,孙秀宁. 巨细胞病毒IE2的红色靶基因与绿色荧光-慢病毒系统的建立及其对人神经干细胞的感染[J]. 医药论坛杂志, 2012, 0(12): 40-41,44 |
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| 作者姓名： | 焦丰叶 孙秀宁 |
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| 作者单位： | 青岛市卫生科技宣传馆;潍坊医学院病原生物学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30900775);潍坊医学科技创新基金前沿探索重点研究项目(K11TS1010) |
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| 摘 要： | 目的 RNA干扰技术沉默连接红色荧光蛋白mCherry与靶基因巨细胞病毒IE2的表达,并初步研究慢病毒感染神经干细胞的可能性。方法以人巨细胞病毒IE2 mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒质粒UTG作为载体,构建靶向巨细胞病毒IE2的shRNA表达质粒,构建携带IE2的mCherry红色荧光蛋白的质粒作为验证shRNA有效性的靶点,并转染293FT细胞。通过红色荧光的表达及RT-PCR和Western Blot确定最佳沉默IE2序列后,将有效的UTG-IE2质粒与辅助质粒共转染293FT细胞,获取高滴度慢病毒。应用慢病毒感染人神经干细胞,观察神经干细胞被慢病毒感染的情况并检测神经干细胞的绿色荧光表达情况。结果成功构建IE2-shRNA慢病毒载体UTG-shRNA-IE2,RT-PCR及Western Blot结果显示慢病毒感染的293FT细胞IE2 mRNA及蛋白表达相对于对照组显著降低。构建的慢病毒可以成功感染神经干细胞。结论红色靶基因-绿色慢病毒系统具有简便的筛选性能;UTG慢病毒对神经干细胞具有较高感染效率,可实现慢病毒介导的RNA干扰在神经干细胞内的有效表达,并为相关研究提供技术支持。
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| 关 键 词： | 人巨细胞病毒 慢病毒 绿色荧光蛋白 红色荧光质粒 即刻早期基因2 |
An EGFP-Lentivirus and red target HCMV-IE2 gene system and its infection in human NSCs |
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| JIAO Feng-ye,SUN Xiu-ning. An EGFP-Lentivirus and red target HCMV-IE2 gene system and its infection in human NSCs[J]. Journal of Medical Forum, 2012, 0(12): 40-41,44 |
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| Authors: | JIAO Feng-ye SUN Xiu-ning |
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| Affiliation: | *Qingdao Hygiene Science Conduct Unit,Qingdao 266003,China |
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