| 利用线性指数PCR-焦磷酸测序技术快速检测3种海洋弧菌 |
| |
| 引用本文： | 杨会勇,那广水,朱术会,邹秉杰,奚涛,周国华. 利用线性指数PCR-焦磷酸测序技术快速检测3种海洋弧菌[J]. 中国药科大学学报, 2009, 40(5): 460-464 |
| |
| 作者姓名： | 杨会勇 那广水 朱术会 邹秉杰 奚涛 周国华 |
| |
| 作者单位： | 中国药科大学生命科学与技术学院;华东医学生物技术研究所;国家海洋环境监测中心海域生态环境重点实验室;中国药科大学生命科学与技术学院;华东医学生物技术研究所;中国药科大学生命科学与技术学院;华东医学生物技术研究所;中国药科大学生命科学与技术学院;中国药科大学生命科学与技术学院;华东医学生物技术研究所;南京大学医学院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No.30470454)；日本日立中央研究所资助项目；江苏省自然科学基金资助项目(No. BK2008067) |
| |
| 摘 要： | 目的： 建立一种基于线性指数聚合酶链式反应(linear-after-the-exponential PCR，LATE-PCR)焦磷酸测序技术快速检测致病性海洋弧菌的方法。方法： 首先根据海洋弧菌的16S rRNA基因和外膜蛋白K(OmpK)基因的目的片段设计引物并优化反应条件进行LATE-PCR扩增，其次利用酶促反应处理PCR产物中干扰焦磷酸测序反应的副产物，最后加入退火引物后直接进行焦磷酸测序。结果： 成功进行了LATE-PCR扩增，制备出足量单链DNA模板供焦磷酸测序反应；取1~2 μL的PCR产物即可获得理想的焦磷酸测序信号。测序结果与Sanger法的结果一致，测得序列与GenBank所报道的相符合。通过对16S rRNA基因片段的检测，可以确认样品是否为海洋弧菌；通过对OmpK基因目的片段的检测可以初步区分弧菌种类，对3种常见弧菌：副溶血弧菌、哈维弧菌和溶藻弧菌成功地进行了检测。结论： 本方法结果准确，灵敏度高，操作简便且成本低，可快速检测大量样品，在弧菌快速检测和诊断中具有很好的应用前景。
|
| 关 键 词： | 海洋弧菌；LATE-PCR；焦磷酸测序；16S rRNA基因；外膜蛋白K基因 |
Rapid discrimination of three species of marine Vibrios by using linear-after-the-exponential PCR coupled with pyrosequencing |
| |
| YANG Hui-yong,NA Guang-shui,ZHU Shu-hui,ZOU Bing-jie,XI Tao and ZHOU Guo-hua. Rapid discrimination of three species of marine Vibrios by using linear-after-the-exponential PCR coupled with pyrosequencing[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2009, 40(5): 460-464 |
| |
| Authors: | YANG Hui-yong NA Guang-shui ZHU Shu-hui ZOU Bing-jie XI Tao ZHOU Guo-hua |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
|
| 点击此处可从《中国药科大学学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国药科大学学报》下载全文 |
